Larry Daley, un rêveur à qui la chance sourit enfin, fait ses adieux à ses amis du musée, remplacés par des hologrammes destinés à rendre le Musée d'Histoire naturelle plus interactif. Eux-mêmes sont envoyés aux Archives nationales, à Washington, avec la tablette d'Ahkmenrah, qui donne vie aux mannequins exposés.
Larry va devoir leur prêter main forte pour affronter Kahmunrah (le très redouté cinquième pharaon, frère d'Ahkmenrah), Al Capone, Ivan le Terrible et Napoléon.
Au passage, il trouve une alliée inattendue en la personne de l'aviatrice Amelia Earhart, dont il tombe éperdument amoureux.

Divertissement familial assumé et réussi, La Nuit au musée 2, du réalisateur Shawn Levy, concrétise un  authentique fantasme de gosse en animant à l'écran mannequins de cire, personnages historiques et animaux empaillés pour une folle sarabande nocturne. Avec à sa tête les comédiens Ben Stiller, Robin Williams, Owen Wilson, Amy Adams et le truculent frenchie Alain Chabat, ce conte de noël gentiment toqué et jamais pleurnichard frappe encore plus fort que le premier opus. Ouvrant tout grand le coffre à jouets, le metteur en scène multiplie les personnages hauts en couleurs, les dialogues gentiment absurdes et les effets spéciaux époustouflants dans un délire sans limites qui rend le savoir vivant et la culture contagieuse.